Tecnicas Histologicas

Técnica Histológica - Los fundamentos para su uso correcto durante el año


Hola, chicos. Soy Mariano Alberti, director del área pregrado del Instituto CTO Medicina. Quería compartir con ustedes un tema clave que considero fundamental para manejarse durante los trabajos prácticos de Histología. En cada clase práctica ustedes deberán reconocer, por medio del uso de un preparado histológico y un microscopio, cada una de las células y tejidos que conforman a todos los órganos del cuerpo humano. Por como se lee, suena muy complicado.


La realidad es que podemos buscar simplificar los conceptos con el fin de poder comprender tal universo aparentemente infinito. Pues bien. Marquemos los 3 conceptos fundamentales que todo alumno debe tener en cuenta para poder encarar tranquilo esta materia:
Todo se reduce a formas geométricas
La técnica de H y E se basa en la unión (o no, ya veremos que algunas estructuras no se tiñen) de dos colorantes a los componentes de una célula
Las células en el cuerpo cumplen una función especial. Para poder hacerlo, requieren tener más desarrollada una o varias organelas por encima del resto. Y este desarrollo hace que se tiña de un color u otro.(no olvidar que en realidad la coloración final de una célula es el resultado del predominio de un color sobre otro, es decir, en la célula hay sustancias basófilas y acidófilas; las que predominen van a dar la coloración final de dicha célula)


TODO SE REDUCE A FORMAS GEOMETRICAS
Todas las células, fibras, moléculas tienen una forma geométrica tridimensional, por ejemplo: cubos, esferas, ovoide, cilindros, etc. Pero tienen que tener en claro un concepto: La técnica histológica nos muestra imágenes bidimensionales de estructuras que en la naturaleza son tridimensionales. Es decir, si yo corto a un cubo lo voy a ver cuadrado; si corto a un cilindro lo veo redondo (si es un corte transversal) o rectangular (si es longitudinal); finalmente, si uno corta una esfera, se verá redonda la imagen. Hagan la prueba mental o dibújenla y verán que estoy en lo cierto. Por eso, si uno aprende a reconocer los contornos de una estructura y la reconoce como una forma geométrica, se nos facilita las cosas para poder comenzar a organizarnos. De todas maneras, tengan en cuenta que existe algo llamado “incidencia de corte”, por lo que podemos llegar a ver las estructuras bidimensionales segmentadas, es decir, a un cuadrado lo puedo llegar a ver por la mitad, a una esfera la puedo ver de menor tamaño que la realidad, etc, Igual, no se preocupen: eso viene con la práctica!


LA TECNICA DE H Y E USA A LA HEMATOXILINA Y A LA EOSINA
En los preparados de rutina, teñidos con la técnica de hematoxilina-eosina, podemos observar (desde el punto de vista tintorial) tres tipos de estructuras:
A) Basófilas
B) Acidófilas (eosinófilas)
C) Negativas (Se ven de color blanco por no ser coloreadas con esta técnica)

¿Qué significa que una estructura del preparado sea de color azulado?
Las estructuras basófilas, por definición poseen afinidad por los colorantes básicos (baso = básico; filo = afinidad). El colorante básico del método de hematoxilina-eosina es la hematoxilina.


La hematoxilina es de color azulado - violácea

Por consiguiente, toda estructura de un tejido que sea basófila se teñirá con hematoxilina, y obviamente se observará de color azulado - violácea.


A su vez, sabemos que las sustancias básicas presentan afinidad por las ácidas, debido a su composición química.

Por ende, las estructuras basófilas (como el núcleo de la célula) son aquellas con una composición fundamentalmente ácida.


En resumen: Una estructura de la célula rica en moléculas ácidas (por ejemplo el núcleo) será basófila, y por esta razón tenderá a unirse con un colorante básico (hematoxilina) el cual por ser de color azulado - violáceo, dará al núcleo su color en una imagen de microscopía óptica (siempre y cuando se halla tratado al tejido con la técnica de hematoxilina y eosina).


¿Qué significa que una estructura del preparado sea de color rosado claro?

Una situación inversa a la recién descripta sucede con la eosina, el cual es el componente ácido de la técnica de hematoxilina y eosina, y que por esta razón tiñe las estructuras básicas.


La eosina es de color rojo pálido o rosado. (No confundir con PAS, que si bien lo describiremos luego, adelantamos que es de color rosado intenso)

De modo que una célula con estructuras que contienen gran cantidad de componentes básicos (por ejemplo las proteínas de la mitocondrias) tenderá a ser teñida por un colorante ácido (eosina), y por tal motivo se observará al microscopio óptico de color rosado pálido (acidófila)


¿Cómo se interpreta una estructura que no se tiñe?
Puede existir la eventualidad de que un conjunto de células posean citoplasmas que presenten imágenes negativas, es decir que se vean blancas o transparentes.


Esto puede significar que no poseen afinidad, ni por la hematoxilina ni por la eosina, o simplemente, puede significar que la célula ha perdido parte de su contenido debido a los pasos de la técnica histológica; en esta última eventualidad, al haberse perdido el contenido, obviamente, ya no queda nada por teñir.


Este último caso ocurre con los lípidos, los cuales no resisten los pasajes de alcoholes de la técnica de hematoxilina y eosina; por consiguiente, cuando se colorea un preparado rico en lípidos, luego de este pasaje de alcoholes, los mencionados lípidos simplemente han desaparecido.


Los lípidos se pueden teñir con la técnica de Sudan. Esta técnica tiñe a los lípidos de color negro - parduzco.


¿Toda estructura que no se tiñe se interpreta como rica en lípidos?
No. Las estructuras con alto contenido de glúcidos, como ser glucógeno, mucoproteínas o proteoglicanos, no poseen afinidad por la hematoxilina ni por la eosina, y por ende determinan la formación de una imagen negativa con esta técnica, a pesar de no ser eliminadas por los alcoholes.


Se pueden teñir a las mencionadas estructuras con la técnica de PAS, la cual le da un color rosa intenso (más intenso que la eosina).


ATENCIÓN: La técnica histológica ha desarrollado colorantes muy específicos para observar los detalles más sutiles de los preparados. Las mencionadas técnicas escapan a los objetivos de este capítulo, que intenta aportar CONCEPTOS GENERALES que faciliten la metodología de diagnóstico diferencial.

¿Qué estructuras de la célula son basófilas?


Todas las ricas en moléculas ácidas, por ejemplo:
Ribosomas (ricos en ÁCIDO ribonucleico)
Retículo endoplasmático rugoso (rico en ribosomas)
Núcleo celular (rico en ÁCIDO desoxirribonucleico)


¿Qué estructuras de las células son acidófilas?
Todas las ricas en moléculas básicasMitocondrias
Proteínas contráctiles (músculo)
Vesículas de almacenamiento de proteínas de exportación (no todas)
Proteinas (no todas):
-Intracelulares: citoesqueleto
-Extracelulares: colageno, elastina

¿Qué estructuras son PAS positivas? Todas las ricas en glúcidos
Vacuolas de células caliciformes
Vesículas de glándulas mucosas
Glucocálix
Membrana basal de los epitelios


¿Qué estructuras son sudanófilas?
Todas las ricas en lípidos
Vaina de mielina de las neuronas
Gotas de inclusión de colesterol (en células de la corteza suprarrenal por ejemplo).
Tejido adiposo que almacena lípidos como una gota de inclusión




3) LAS CÉLULAS EN EL CUERPO CUMPLEN UNA FUNCIÓN ESPECIAL.
Los organismos pluricelulares como el ser humano han conseguido a lo largo de la evolución que existan grupos de células que cumplan funciones especiales distintas al resto. Pero ojo, estas funciones permiten que el ser humano como un TODO funcione correctamente. Ahora bien, podemos decir que, si bien las funciones de una célula de un acino seroso y un plasmocito es distinta (una produce enzimas y la otra produce anticuerpos), ambas coinciden en una cosa. Ambas producen proteínas. Y toda célula que produce proteínas debe tener una maquinaria biosintética específica para producirla.


CONCLUSION: Si la célula produce proteínas, siempre tiene que tener el núcleo de cromatina laxa con nucleolo evidente. La laxitud nos muestra que se está transcribiendo ARNm para producir una proteína, y el nucleolo nos pone en evidencia que se están armando ribosomas en esa zona, fundamentales para poder sintetizar esa proteína.


Fijense entonces que la célula, si su función es producir proteínas en forma activa, tiene que tener un núcleo de cromatina laxa con nucleolo evidente, y su citoplasma debe tener polirribosomas en gran cantidad (si la proteína no se exporta) o un REG y un Golgi desarrollados (siempre que haya REG desarrollado hay un golgi importante), por lo que la célula finalmente, según todo lo antedicho, tiene un citoplasma basófilo.


Y esto es bueno, porque sabiendo cuales son las funciones de las organelas, si a nosotros nos preguntan como es una célula que produce proteínas de exportación, rápidamente podremos responder que se trata de una “célula con núcleo de cromatina laxa, nucleolo evidente y citoplasma basófilo, donde se evidencia un REG desarrollado y un Golgi importante”. De todas maneras, recuerden que existen células como el fibroblasto, que si bien tiene una actividad biosintética muy importante, con un núcleo de cromatina laxa y nucleolo evidente, su citoplasma es acidófilo. Por que? Dato interesante para averiguar. Un desafío interesante es buscar células que produzcan proteínas en los libros y ver que dice... Eso sí, Lo que diferencia a una célula productora de proteínas de otra es la forma celular, la ubicación y forma del núcleo y la proteína que produce. El resto, son iguales.


Y así como podemos hacer grupo de pertenencia de célula productora de proteínas, podemos formar varios grupos más. Por ejemplo, cómo serían las siguientes células cuyas funciones son:
1) Producir hormonas esteoroideas
2) Tener actividad macrofágica
3) Ser célula madre
4) Contraerse


Para poder responder a estos items, deben tener bien claro las funciones de cada organela. No es difícil, pónganse a prueba.


Recuerden finalmente una frase que me transmitieron hace tiempo, y que fue muy orientadora para poder comprender a los preparados histológicos:


“Todas las células tienen a todas las organelas, pero aquellas que se encuentran en mayor cantidad, definen a la función que la célula cumple en el organismo, y finalmente definen la tinción que tendrá dicho citoplasma”

Mariano Alberti
Docente de Histología